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Elisa實(shí)驗(yàn):ELISA試劑盒的靈敏度該如何判定?
更新時(shí)間:2025-08-28瀏覽:24次

  ELISA試劑盒的靈敏度該如何判定?

  ELISA試劑盒的靈敏度判定需結(jié)合以下關(guān)鍵指標(biāo)和方法綜合評(píng)估:

  一、靈敏度的定義與核心指標(biāo)?

  檢測(cè)限(LOD)?

  指能可靠檢測(cè)到目標(biāo)物的低濃度,計(jì)算公式為:

  LOD = 空白信號(hào)均值(Sb) + 3 × 空白信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)差(σ)? ?。

  實(shí)際應(yīng)用中,試劑盒說明書常標(biāo)注“靈敏度"即對(duì)應(yīng)LOD(如10pg/mL)?。

  定量限(LOQ)?

  可準(zhǔn)確定量的低濃度,計(jì)算公式為:

  LOQ = Sb + 10 × σ? ?。

  通常要求信號(hào)變異系數(shù)(CV)≤20%,確保結(jié)果可重復(fù)?。

  二、判定方法?

  標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)證?

  選擇低濃度標(biāo)準(zhǔn)品(如LOD附近濃度),重復(fù)檢測(cè)3次,計(jì)算信號(hào)強(qiáng)度與背景噪聲的比值(S/N≥3為合格)?。

  加標(biāo)回收率測(cè)試?

  在樣本中添加已知濃度的目標(biāo)物,檢測(cè)回收率應(yīng)在80%-120%范圍內(nèi)?。

  示例:若添加50pg/mL標(biāo)準(zhǔn)品,測(cè)得濃度為45-55pg/mL則符合要求。

  稀釋線性實(shí)驗(yàn)?

  對(duì)樣本進(jìn)行梯度稀釋,檢測(cè)信號(hào)值與理論值的偏差應(yīng)≤20%?。

  三、實(shí)驗(yàn)優(yōu)化建議?

  樣本處理?:避免反復(fù)凍融,離心去除干擾物?。

  對(duì)照設(shè)置?:同步檢測(cè)空白對(duì)照(僅緩沖液)和陰性樣本,確認(rèn)無(wú)交叉反應(yīng)?。

  數(shù)據(jù)分析?:優(yōu)先選擇線性范圍內(nèi)(R2≥0.99)的數(shù)據(jù)點(diǎn)計(jì)算濃度?。

  四、常見誤區(qū)?

  混淆“靈敏度"與“檢測(cè)范圍":靈敏度是LOD,而檢測(cè)范圍是標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性區(qū)間(如30-900pg/mL)?。

  忽略批間差異:板內(nèi)變異系數(shù)應(yīng)<5%,板間變異系數(shù)應(yīng)<15%?。

  通過上述方法可系統(tǒng)評(píng)估試劑盒靈敏度,確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。

  注:以上資料僅供參考,如需進(jìn)一步了解產(chǎn)品詳情,可參考品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師。

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