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以下是關于人促紅細胞生成素(EPO)ELISA試劑盒的實驗使用說明:
BS-10009 人促紅細胞生成素(EPO)ELISA試劑盒
一、實驗原理
雙抗體夾心法?:采用包被抗人EPO抗體的微孔板捕獲樣本中的EPO,再通過酶標抗體形成復合物,經顯色反應測定濃度。
顯色機制?:底物TMB在過氧化物酶催化下顯藍色,終止后轉為黃色,OD值與EPO濃度成正比。
二、試劑盒組成
標準品?:需用蒸餾水稀釋至400mIU/mL,梯度稀釋后使用。
酶標試劑?:HRP標記的檢測抗體。
洗滌液/終止液?:濃縮洗滌液需20倍稀釋,終止液為硫酸溶液。
三、樣本處理
血清/血漿?:室溫靜置后離心取上清,避免反復凍融。
組織勻漿?:PBS沖洗后勻漿,離心取上清。
細胞培養上清?:直接離心后檢測。
四、操作步驟
加樣?:空白孔加稀釋液,標準孔和樣本孔各加100μL,37℃孵育2小時。
洗滌?:棄液體后加檢測抗體A/B工作液,分別孵育1小時,洗滌3-5次。
顯色?:加TMB底物避光反應15-30分鐘,終止后450nm測OD值。
五、注意事項
預實驗?:建議使用前做預實驗以優化條件。
時間控制?:加樣間隔不超過10分鐘,避免孵育時間差異。
保存?:試劑2-8℃保存,樣本-20℃以下凍存。
六、結果計算
以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制曲線,樣本濃度通過回歸方程計算。
如需更詳細的步驟圖示或特殊樣本處理方法,可參考試劑盒附帶的完整說明書。
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